Выделение ДНК

Выделение ДНК * выдзяленне ДНК * DNA extraction — совокупность технических приемов, включающих этапы разрушения клеток или тканей, выделения ядер, обработки протеинкиназой К или др. типами протеиназ, депротеинизации ДНК фенолом и хлороформом, осаждения этанолом или диализа. В качестве дополнительной очистки используются обработка РНКазой и центрифугирование в плотности хлористого цезия. Процедуру выделения ДНК можно ускорить за счет совмещения различных этапов: напр., лизис клеток проводят в присутствии РНКазы (100 мкг/ мл), что позволяет на ранних этапах выделения освободиться от основной части РНК, либо вообще исключают обработку препаратов ДНК РНКазой, предпочитая добавлять ее (1 нг/мкл) в инкубационную смесь при рестрикции. В ряде случаев в лизирующий буфер вводят реагенты (формамид, мочевина), способствующие лизису клеток и разрушению ДНК-белковых комплексов. Использование мочевины в сочетании с высокой концентрацией солей и додецилсульфата натрия (SDS) позволяет избирательно осадить основную часть белков и РНК, тем самым ускоряя длительную процедуру депротеинизации ДНК. При выделении ДНК из животных тканей для более эффективной ее очистки с успехом используются высокие концентрации формамида, перхлората натрия, хлорида натрия. Интерес представляет метод, использующий электрофильтрацию лизата ядер через мембрану ХМ-300. В этом случае высокополимерная ДНК задерживается на мембране, в то время как белки, РНК и низкомолекулярные вещества уходят в электрофоретический буфер. Существует также ряд других методов В. ДНК, в т. ч. частично и даже полностью автоматизированных (роботизированная станция EVO7 TECAN, напр.).